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考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2025-07-14 點(diǎn)擊量:221

考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體25mL×1 瓶,4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:500μg/mL×1 瓶,4℃保存,臨用前用蒸餾水稀釋為50μg/mL。

產(chǎn)品說(shuō)明:

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

在酸性溶液中,考馬斯亮藍(lán)G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物:該復(fù)合物在595nm處有最大吸 收峰。 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高,適合微量蛋白質(zhì)分析。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取

1.   液體樣品:澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。

2.   組織樣品:按照組織質(zhì)量 (g) :提取液體積(mL)為1:5~ 10 的比例 (建議稱取約0. 1g組織,加入 1mL 提取液 (自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水) ) 。冰浴勻漿,    10000rpm ,4℃離心10min ,取上清,即待測(cè)液。  (動(dòng)物樣品常常需要稀釋)

3.   細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量 (104個(gè)) :提取液體積 (mL) 為500~ 1000:1 的比例 (建議500 萬(wàn)細(xì) 胞加入1mL 提取液) ,冰浴超聲波破碎細(xì)胞 (功率300w ,超聲3 s ,間隔7s ,總時(shí)間3min ) ;然后 10000rpm ,4℃ ,離心10min ,取上清置于冰上待測(cè)。

二、吸光值測(cè)定

1.   分光光度計(jì)預(yù)熱30 min 以上,蒸餾水調(diào)零。

2.   空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL 蒸餾水,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 空白管。

3.   標(biāo)準(zhǔn)管:取0.5 mL EP管,加入40μL 標(biāo)準(zhǔn)液,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4.   測(cè)定管:取0.5 mL EP管,加入40μL 待測(cè)液,250μL 試劑一,混勻后室溫靜置10min ,取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,記為A 測(cè)定管。

三、蛋白質(zhì)含量:

C 待測(cè) (μg/mL) =50×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)品蛋白質(zhì)濃度,50μg/mL。

注意事項(xiàng):

1.   加考馬斯亮藍(lán)后,在10~20min 內(nèi)吸光值相對(duì)較穩(wěn)定,因此須在10~20min 完成比色。

2.   不宜用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,測(cè)完成后立即用95%乙醇沖洗。

3.   測(cè)定前用1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),確保蛋白濃度在0~ 100μg/ml 范圍內(nèi),否則需要做相應(yīng)稀釋。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途!

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